Konstruksi, Ekspresi, Dan Uji Potensi Enzim Reverse Transcriptase Moloney Murine Leukemia Virus Dalam Escherichia Coli Bl21 (De3) Sebagai Alternatif Enzim Komersial

Alfiyanti, Elsa (2026) Konstruksi, Ekspresi, Dan Uji Potensi Enzim Reverse Transcriptase Moloney Murine Leukemia Virus Dalam Escherichia Coli Bl21 (De3) Sebagai Alternatif Enzim Komersial. S2 thesis, Universitas Andalas.

	Text (Cover dan Abstrak) Abstrak.pdf - Published Version Download (87kB)
	Text (BAB 1 Pendahuluan) BAB 1 Pendahuluan.pdf - Published Version Download (103kB)
	Text (BAB 5 Penutup) BAB 5 Penutup.pdf - Published Version Download (45kB)
	Text (Daftar Pustaka) Daftar Pustaka.pdf - Published Version Download (146kB)
	Text (Tesis Fulltext) Tesis Fulltext.pdf - Published Version Restricted to Repository staff only Download (6MB) | Request a copy

Abstract

Ketergantungan tinggi terhadap reagen RT-PCR impor menjadi kendala dalam pengembangan kemandirian bioteknologi di Indonesia, terutama pada komponen kunci berupa enzim reverse transcriptase (RT). MMLV-RT dikenal memiliki fidelity tinggi dan aktivitas RNase H rendah, sehingga berpotensi dikembangkan sebagai enzim rekombinan untuk aplikasi diagnostik molekuler. Penelitian ini bertujuan untuk mengevaluasi ekspresi, optimasi produksi, dan aktivitas biologis enzim RT rekombinan dalam sistem Escherichia coli BL21 (DE3) sebagai kandidat pengganti enzim RT komersial. Gen sintetik RT hasil optimasi kodon diklon ke dalam vektor pET-21a(+) dan ditransformasikan ke dalam E. coli DH5α dan BL21 (DE3). Ekspresi diinduksi menggunakan IPTG dengan variasi waktu (2–16 jam). Protein dimurnikan menggunakan kromatografi afinitas Ni-NTA dan dianalisis dengan SDS-PAGE. Aktivitas enzim diuji melalui sintesis cDNA dari RNA target yang dikonfirmasi menggunakan PCR, serta dianalisis secara kuantitatif dengan densitometri ImageJ. Konstruksi gen berhasil dikonfirmasi dengan pita DNA ±1741 bp, dan ekspresi protein menghasilkan pita spesifik ±55,4 kDa. Yield protein meningkat seiring waktu induksi dengan nilai tertinggi pada 16 jam sebesar 3,4 mg/mL. Enzim rekombinan mampu mensintesis cDNA secara spesifik pada gen β-actin dan ORF1ab SARS-CoV-2. Analisis densitometri menunjukkan aktivitas enzim rekombinan mencapai ±85–90% dibandingkan enzim RT komersial. Enzim RT rekombinan berhasil diekspresikan dengan yield tinggi dan aktivitas biologis yang mendekati enzim komersial, sehingga berpotensi dikembangkan sebagai alternatif enzim reverse transcriptase untuk mendukung kemandirian reagen diagnostik molekuler di Indonesia.

Actions (login required)

View Item