KONSTRUKSI PLASMID REKOMBINAN pET-REP DAN EKSPRESI GEN REP (C1) GEMINIVIRUS KE DALAM Escherichia coli STRAIN BL21

ELMA, NITA GOZALIA (2018) KONSTRUKSI PLASMID REKOMBINAN pET-REP DAN EKSPRESI GEN REP (C1) GEMINIVIRUS KE DALAM Escherichia coli STRAIN BL21. Diploma thesis, Universitas Andalas.

Preview	Text (COVER DAN ABSTRAK) COVER dan ABSTRAK.pdf - Published Version Download (210kB) | Preview
Preview	Text (BAB I PENDAHULUAN) BAB I PENDAHULUAN.pdf - Published Version Download (223kB) | Preview
Preview	Text (BAB V PENUTUP) BAB V PENUTUP.pdf - Published Version Download (110kB) | Preview
Preview	Text (DAFTAR PUSTAKA) DAFTAR PUSTAKA.pdf - Published Version Download (325kB) | Preview
	Text (SKRIPSI FULLTEXT) SKRIPSI ELMA NITA GOZALIA FULL.pdf - Published Version Restricted to Repository staff only Download (3MB)

Abstract

Gen Rep (C1) Geminivirus menghasilkan protein replikasi (Rep) yang berinteraksi dengan Retinoblastoma-related protein (RBR) pada tanaman saat terjadi infeksi Geminivirus. Interaksi tersebut mengganggu fungsi RBR dan faktor transkripsi. Sehingga mekanisme petahanan tanaman cabai terhadap gejala penyakit kuning keriting (PepYLCVD) terblokir. Gen NPR1 merupakan koaktivator transkripsi yang terlibat dalam regulasi mekanisme pertahanan Systemic Acquired Resistance (SAR) tanaman cabai. Secara in silico protein Rep memblokir mekanisme SAR yang diregulasi oleh gen NPR1. Penelitian ini bertujuan untuk mendapatkan konstruksi plasmid ekspresi pET-28a(+) rekombinan gen Rep (C1) dan protein Rep untuk diekspresikan di dalam E.coli BL21. Penelitian ini bermanfaat untuk studi interaksi Geminivirus dengan koaktivator transkripsi tanaman cabai. Konstruksi dilakukan dengan cara meligasikan plasmid serta Gen Rep (C1) yang telah direstriksi menggunakan enzim restriksi BamHI dan SacI. Konstruksi plasmid rekombinan pET-Rep dikonfirmasi dengan amplifikasi dan verifikasi urutan nukleotida melalui teknik sekuensing. Hasil verifikasi urutan nukleotida membuktikan bahwa gen Rep (C1) berhasil dikonstruksi ke dalam plasmid pET-28a(+) dengan posisi dan orientasi yang tepat. Plasmid rekombinan pET-Rep dilanjutkan ke tahap uji ekspresi menggunakan host E.coli BL21. Ekspresi dilakukan menggunakan metode induksi dengan IPTG. Protein Rep hasil ekspresi dipurifikasi menggunakan MagnehisTM Protein Purification System. Protein Rep divisualisasi dengan SDS-PAGE. Visualisasi menunjukkan bahwa protein Rep berhasil diekspresikan di dalam E.coli BL21 dimana ukuran protein sesuai estimasi, yaitu 41,03 kDa. Kata kunci: Ekspresi, gen Rep (C1), konstruksi, PepYLCVD, plasmid pET-Rep dan protein Rep.

Actions (login required)

View Item